Un grupo de investigadores japoneses y franceses ha realizado un exhaustivo análisis cuantitativo del azúcar que se desprende de las astillas (virutas o chips) tostadas de roble francés (quercus petraea) al vino. Las cantidades de azúcares transferidas varían según la temperatura de tostado del roble, y el fenómeno se produce por la descomposición térmica de la celulosa y la hemicelulosa en las astillas. El estudio se llevó a cabo con chips en vinos modelo en laboratorio, pero los científicos advierten que es necesario seguir experimentando con barricas, ya que es muy posible que suceda lo mismo en las barricas de roble reales. Como sea, anticipan, no se espera que los azúcares extraídos de las astillas de roble afecten el sabor del vino porque sus cantidades son bajas.
En este estudio se realizaron experimentos de extracción utilizando vino modelo en virutas de roble francés tostadas a varias temperaturas para investigar los azúcares extraídos. De las virutas de roble se extraía una cierta cantidad de azúcares, y la cantidad variaba significativamente según la temperatura de tostado. El análisis de la composición de los azúcares extraídos reveló la presencia de cantidades sustanciales de xilosa y glucosa, mostrando la composición diferencias significativas en función de la temperatura de tostado. Además, se aclaró que los azúcares extraídos incluían monosacáridos y oligo o polisacáridos.
Esta investigación representa el primer análisis exhaustivo que correlaciona la temperatura de tostado con la extracción de una cantidad sustancial de azúcares de los chips de roble tostados.
Introducción
El uso de barricas en la elaboración del vino es importante porque aumenta la complejidad del sabor del vino y mejora la calidad del vino. Las barricas de vino son generalmente de roble y ensambladas por toneleros. Un proceso esencial en la elaboración de barricas de vino es el tratamiento térmico llamado «tostado», en el que se tuesta el interior de la madera a fuego abierto. En el interior de la madera se producen diferentes cambios químicos dependiendo del grado de tostado.
El grado de tostado se clasifica principalmente en tostado ligero, tostado medio y tostado fuerte, y tiene un efecto significativo en las características sensoriales del vino, ya que se extraen diferentes sustancias de las barricas.
Los compuestos extraídos del vino de las barricas de roble se pueden clasificar en términos generales en componentes volátiles y no volátiles. Los compuestos volátiles afectan el aroma del vino e incluyen compuestos típicos como la lactona del roble, el eugenol y la vainillina, que son compuestos aromáticos característicos de la madera de roble.
Los compuestos no volátiles también se han estudiado intensamente en los últimos años, centrándose en los compuestos fenólicos que afectan el sabor, la estabilidad del color y la sensación en boca del vino. Se ha demostrado que la cantidad de elagitanino, un componente típico no volátil, se reduce al tostar. Por lo tanto, debido al impacto significativo del tostado en barrica en la calidad del vino, se han realizado intensas investigaciones sobre estos compuestos derivados de la barrica.
Varios estudios se han centrado en la extracción de azúcares de la madera de barrica. La madera está compuesta de polímeros naturales como la celulosa y la hemicelulosa, que tienen una estructura unida a azúcar. Por tanto, no sorprende que estos polímeros naturales se descompongan térmicamente mediante tostado y se extraigan como azúcares. De hecho, la extracción de azúcares de las barricas ha sido reportada en varios estudios sobre bebidas espirituosas.
Experimentos con brandy envejecido en barricas de roble durante 30 años demostraron que se podían extraer hasta 500 mg/L de monosacáridos. Otro experimento demostró que el contenido de azúcar en el brandy envejecido en barricas de roble durante 40 años aumentaba a 2000 mg/L.
Belchior realizó una cromatografía en papel sobre brandy envejecido en barricas de roble Limousin durante 6 meses y descubrió que se extraían arabinosa, glucosa, xilosa, ramnosa y fucosa (Belchior, 1972).
Desafortunadamente, los académicos han prestado poca atención a la extracción de azúcares de las barricas de vino. El investigador Del Álamo demostró que el almacenamiento en barriles aumenta la extracción de azúcar, pero no está claro si este azúcar se deriva de los barriles. Le Floch y otros sugirieron que los polisacáridos se pueden extraer de las barricas de madera para convertirlos en vino. Sin embargo, los tipos y cantidades de azúcares extraídos de las barricas en condiciones de envejecimiento en barricas de vino aún no están claros.
En este estudio, se llevaron a cabo experimentos con vinos modelo para analizar los azúcares extraídos de las astillas de roble francés y el efecto de la temperatura de tostado sobre el contenido de azúcar. Hasta donde sabemos, este estudio es el primero en evaluar cuantitativamente la extracción de azúcares de astillas de roble.
Métodos y materiales
Preparación de muestras de astillas de roble: Se utilizaron duelas de duramen de roble francés (Quercus petraea) cultivado en Allier, Francia. Las duelas (aproximadamente 30 kg) se trituraron utilizando una trituradora (KCM181D, Kioritz Corp., Tokio, Japón). Las dimensiones de las astillas de roble seleccionadas para este trabajo fueron aproximadamente 1,5 cm × 1,0 cm × 0,1 cm (ancho × largo × espesor). Se tostaron astillas de roble a 180 °C, 200 °C, 220 °C, 240 °C, 260 °C y 280 °C durante 10 minutos en un horno de mufla (Del Álamo Sanza et al., 2004; Jackson, 2008). (Yamato FP313, Tokio, Japón) y se enfrió a temperatura ambiente. También se utilizaron como muestras de control astillas de roble sin tratamiento de tostado (Untoasted, UT).
Medición de la pérdida de peso durante el tostado: Las astillas de roble (aproximadamente 6 g) se pesaron antes del tostado (peso inicial). Después del tratamiento de tostado, las virutas se dejaron reposar en una habitación y se pesaron varias veces hasta que su peso se volvió constante. Se calculó el porcentaje de pérdida de peso respecto al peso inicial. El experimento se realizó en cinco repeticiones.
Extracción y preparación de muestras de virutas de roble con vino modelo: Todos los vinos modelo utilizados en este estudio contenían 5 g/l de tartrato de potasio y 12 % (v/v) de etanol y se ajustaron a pH 3,6 usando HCl. Se agregaron seis gramos de virutas de roble a 1 litro de un vino modelo en una botella de vidrio y el espacio de cabeza se reemplazó con gas N2. Posteriormente, los experimentos de extracción se realizaron en condiciones de oscuridad a 25 °C con agitación a 80 rpm utilizando un agitador (Yamato Scientific Co., Ltd., BW400, Tokio, Japón). En los días 0, 1, 3, 5, 7, 10, 13, 16 y 19 de los experimentos de extracción, se recolectaron muestras de 3 ml y se sometieron a análisis de azúcares neutros. Después del muestreo, el espacio de cabeza se reemplazó con gas N2. Después de 21 días de extracción, el líquido restante se colocó en un evaporador rotatorio para eliminar el etanol y luego se liofilizó para obtener un polvo, y el polvo se usó como extracto liofilizado para el análisis por cromatografía de permeación en gel (GPC). Todos los experimentos de extracción se realizaron por triplicado.
Determinación de azúcares neutros: Los azúcares neutros se determinaron mediante el método de fenol-ácido sulfúrico, como lo describen Dubois et al. (1956). Las cantidades de azúcares neutros se calcularon como equivalente de xilosa. Todas las mediciones se realizaron por triplicado.
Análisis HPLC de azúcares: Los azúcares extraídos de astillas de roble francés se determinaron por separado para determinar la composición de monosacáridos y azúcar total. La composición total del azúcar se analizó hidrolizando muestras con TFA 8M seguido de derivatización ABEE según el método de Gomis et al. (Gomis et al., 2003) utilizando un kit de etiquetado ABEE (MGG Woodchem Corporation, Tokio, Japón). Los monosacáridos se analizaron utilizando el mismo método, omitiendo el proceso de hidrólisis ácida.
Las cantidades de oligo o polisacáridos se determinaron calculando la diferencia entre las cantidades de monosacáridos y el contenido total de azúcar. El sistema HPLC estaba equipado con una bomba (PU-2089 Plus), un horno de columna (CO-2065 Plus), un muestreador automático (AS-2055 Plus) y un detector UV (UV-2075 Plus), todos de JASCO. Corp. (Tokio, Japón). Las muestras se pasaron a través de un filtro de jeringa de PTFE de 0,45 µm (Lab Lab Company Co., Ltd., Tokio, Japón).
Se inyectaron alícuotas de 10 µl en la columna (Honenpak C18, 75 mm × 4,6 mm d.i., MGC Woodchem Corp., Tokio, Japón). Los azúcares derivatizados con ABEE se detectaron midiendo la absorbancia a 305 nm. La temperatura para la separación cromatográfica se fijó en 30 °C. Los azúcares en las muestras se cuantificaron mediante curvas de calibración preparadas con soluciones estándar de dos azúcares ácidos (GlcA, GalA) y siete azúcares neutros (Gal, Man, Glc, Ara, Xyl, Fuc, Rha). Todas las mediciones se realizaron por triplicado.
Cromatografía de permeación en gel (GPC): El GPC se midió utilizando el método descrito por Vera-Loor et al. (2023). El sistema HPLC estaba equipado con dos bombas (PU-2080 Plus), un horno de columna (CO-2065 Plus), un muestreador automático (AS-2057 Plus) y un detector RI (RI-4030), todos de JASCO Corp. . (Tokio, Japón). El extracto liofilizado se disolvió en THF (200 mg/ml) y se pasó una alícuota del extracto disuelto a través de un filtro de jeringa de nailon de 0,45 µm (Lab Lab Company, Tokio, Japón). Luego, se inyectaron 100 µl del filtrado en la columna (Agilent PLgel MIXED-D, 30 cm × 7,5 mm d.i., Santa Clara, CA, EE. UU.). La fase móvil fue THF, el caudal fue 1,0 ml/min y la temperatura de la columna se ajustó a 35 °C. El estándar utilizado en las mediciones para la calibración de la columna fue poliestireno. El peso molecular se estimó con esta curva de calibración (r2 = 0,998). El peso molecular de cada pico se estimó utilizando poliestireno como estándar. Cada medición se tomó sólo una vez.
Análisis estadístico: El análisis estadístico se realizó mediante la prueba de diferencias honestamente significativas de Tukey con JMP (SAS Institute Inc., Cary, NC, EE. UU.).
Resultados y discusión
Cambio en el peso de las virutas después del tostado: Los porcentajes de pérdida de peso fueron 4,7 %, 5,2 %, 6,2 % y 9,8 % después del tostado a 180 °C, 200 °C, 220 °C y 240 °C, respectivamente, lo que demuestra que la pérdida de peso aumentó al aumentar la temperatura de tostado. (Figura 1).
Por otro lado, se observaron pérdidas de peso severas del 17,3 % y 26,4 % a 260 °C y 280 °C, respectivamente. Trabajos anteriores han demostrado que los componentes de la madera sufren varias etapas de cambios químicos dependiendo de la temperatura del tratamiento térmico (Esteves y Pereira, 2008). A bajas temperaturas, desde la temperatura ambiente hasta 150 °C, el secado se produce principalmente, primero con la pérdida de agua libre en la madera y finalmente con la eliminación del agua ligada. A temperaturas de tratamiento térmico de 180 °C a 250 °C, los polímeros naturales de la madera sufren cambios químicos graduales e irreversibles, y a temperaturas superiores a 250 °C, se produce la carbonización de la madera, formando dióxido de carbono y productos de pirólisis. Por lo tanto, especulamos que la importante pérdida de peso a 260 °C y 280 °C, como se muestra en la Figura 1, se debió a la carbonización de las astillas de roble causada por el tostado a altas temperaturas, lo que gasificó los componentes de la madera e hizo las astillas más ligeras.
Contenido de azúcar neutro en el extracto: Los azúcares neutros extraídos de las virutas de roble en los vinos modelo se cuantificaron mediante el método del ácido fenol-sulfúrico y se generaron curvas de progreso (Figura 2).
Para todas las condiciones de tostado, se observó una rápida extracción de azúcar en una semana (Figura 2). Posteriormente, la extracción de azúcar neutro fue lenta hasta el día 21. La Figura 1 muestra que el porcentaje de pérdida de peso aumenta a medida que aumenta la temperatura de tostado. Por tanto, se añaden más virutas de roble a temperaturas de tostado más altas que a temperaturas de tostado más bajas. Se calcularon las cantidades de azúcares neutros extraídos por gramo de astillas originales de roble sin tostar el día 21 (Figura 3), considerando la pérdida de peso de las astillas como materia prima debido al tratamiento térmico descrito en 3.1.
Las barras indican la desviación estándar. Letras diferentes indican diferencias significativas entre muestras (p < 0,05).
Los azúcares extraídos de las virutas fueron aproximadamente 12 mg/g de las virutas originales y fueron constantes desde UT hasta condiciones de tostado de 240 °C. Sin embargo, se mostró una reducción significativa para las virutas tratadas a más de 260 °C. Esto sugiere que, al tostar a temperaturas superiores a 260 °C, se produjeron alteraciones en la estructura de los polisacáridos en los chips que condujeron a una disminución en el contenido de azúcar extraído, además de los cambios en el contenido de agua unida en los chips. Además, en este experimento de extracción preliminar utilizando astillas de roble comerciales, la cantidad de azúcares extraídos fue más del doble que la de este estudio (datos no mostrados). Por lo tanto, la cantidad de azúcar extraída puede variar entre los fabricantes de chips.
La madera utilizada para las barricas suele pasar por un proceso de curado, durante el cual la madera se expone a la lluvia y al viento durante dos o tres años mientras se seca lentamente de forma natural. Por lo tanto, se espera que los componentes solubles en agua, como los azúcares, se eliminen durante este proceso de condimento. Sin embargo, se encontró que se extrajeron 12,2 mg/g de chips de azúcar de los chips UT. Se especula que los azúcares presentes dentro de las duelas antes de picarlas apenas se eliminaron durante el proceso de condimento y quedaron expuestos después de picarlas y disolverse. Se requiere más investigación para confirmar esta especulación.
Análisis del contenido y composición de azúcar: Los contenidos y composiciones de monosacáridos y oligo o polisacáridos extraídos en vinos modelo se midieron el día 21 y los resultados se muestran en las Figuras 4 y 5, respectivamente.
La Figura 4 muestra que se extrajeron monosacáridos en los vinos modelo a partir de virutas de roble sin tostar (UT) y de virutas de roble tostadas a diferentes temperaturas.
De acuerdo con los resultados de este experimento, se ha informado que monosacáridos como Ara, Xyl, Gal y Glc se extraen de la madera de barril. Las cantidades de monosacáridos extraídos en los vinos modelo a partir de astillas de roble UT y astillas de roble tostadas a 180 °C y 200 °C mostraron ligeras diferencias, es decir, fueron 18,77 mg/L, 16,12 mg/L y 16,45 mg/L, respectivamente.
Además, no se observaron diferencias significativas en la composición de los azúcares extraídos en los vinos para las tres muestras de virutas de roble. Por otro lado, las cantidades de monosacáridos extraídos en los vinos modelo disminuyeron drásticamente para las virutas de roble tostadas a 220 °C o temperaturas más altas; para las astillas de roble tostadas a 260 °C, fue la más baja con 6,73 mg/L. En la muestra UT y en las muestras de astillas de roble tostadas a 180 °C y 200 °C, se detectaron altas cantidades de Glc y Ara en los vinos modelo.
Por otro lado, las cantidades de Glc y Ara disminuyeron gradualmente, mientras que la cantidad de Xyl aumentó en los vinos modelo a medida que la temperatura de tostado de las virutas de roble aumentó de 220 °C a 260 °C. La cantidad de Xyl disminuyó rápidamente y la de Glc aumentó significativamente en el vino modelo para las virutas de roble tostadas a 280 °C.
La Figura 5 muestra que las cantidades de oligo o polisacáridos extraídos en los vinos modelo de la muestra UT y las muestras de astillas de roble tostadas a 180 °C y 200 °C no cambiaron mucho, siendo 30,17 mg/L, 27,05 mg/L y 25,22 mg/L, respectivamente.
Sin embargo, la composición de los azúcares extraídos en los vinos modelo de estas muestras de virutas de roble difirió significativamente a diferentes temperaturas de tostado. Glc y Ara se extrajeron en grandes cantidades de la muestra de UT, pero en bajas cantidades de astillas de roble tostadas a 180 °C.
Por otro lado, aumentaron las cantidades de Gal y Fuc extraídos de astillas de roble tostadas a 180 °C. La cantidad de Xyl extraída aumentó a medida que la temperatura de tostado de las virutas de roble aumentó de 180 °C a 240 °C, y la mayor cantidad se extrajo de las virutas de roble tostadas a 240 °C (18,99 mg/L).
Las cantidades de azúcares extraídas aumentaron en las astillas de roble tostadas a 200 °C y 240 °C, y la mayor cantidad se extrajo de las astillas de roble tostadas a 240 °C (44,80 mg/L). Por otro lado, las cantidades de oligo o polisacáridos extraídos de astillas de roble tostadas a 260 °C y 280 °C disminuyeron a 23,39 mg/L y 20,80 mg/L, respectivamente.
Además, las cantidades de Gal y Xyl extraídas disminuyeron rápidamente de las astillas de roble tostadas a 260 °C, mientras que la cantidad de Glc aumentó. Por lo tanto, está claro que se extrae una cantidad significativa de oligo/polisacárido de las astillas de roble. Los oligosacáridos presentes en el vino se han estudiado en los últimos años y cada vez se comprende mejor su abundancia y su función. Sin embargo, los efectos de los oligosacáridos derivados de la barrica en el vino no están claros y se necesita más investigación.
No se sabe si los polisacáridos pueden afectar el sabor, pero pueden tener algún efecto, como un efecto sobre la supresión de la precipitación del ácido tartárico. Si estos azúcares son polisacáridos, la cantidad extraída es de 1/3 a 1/10 de la de los hollejos o la levadura. Sin embargo, un experimento de extracción preliminar con astillas de roble comerciales confirmó que la cantidad de polisacáridos extraídos fue aproximadamente el doble que la de los azúcares obtenidos aquí (datos no mostrados).
Aunque las cantidades de azúcares neutros extraídas de la muestra UT y de las muestras de astillas de roble tostadas hasta 240 °C permanecieron constantes, como se muestra en la Figura 3, las composiciones de los azúcares extraídas de las muestras de astillas de roble tostadas a diferentes temperaturas fueron significativamente diferentes. como se muestra en la Figura 5.
Además, a medida que aumentaba la temperatura de tostado de las astillas de roble, la cantidad de monosacáridos extraídos disminuía, mientras que la cantidad de oligosacáridos o polisacáridos extraídos aumentaba. Los experimentos detectaron dos azúcares ácidos (GlcA y GalA) y siete azúcares neutros (Gal, Man, Glc, Ara, Xyl, Fuc, Rha).
Los principales polisacáridos de la madera son la celulosa y la hemicelulosa. En particular, la hemicelulosa se compone principalmente de pentosas (Xyl y Ara), hexosas (Man, Glc y Gal) y ácidos urónicos (GlcA y GalA). Según los tipos de azúcares detectados en este estudio, es muy probable que se hayan extraído azúcares derivados de los polisacáridos de la madera.
En general, la pared celular de la madera está compuesta por microfibrillas, que son estructuras cristalinas formadas por agregados de moléculas de celulosa, y una matriz amorfa compuesta por hemicelulosa y lignina que llena el espacio entre las estructuras cristalinas. La hemicelulosa amorfa es menos estable térmicamente que la celulosa cristalina y, por tanto, es más susceptible a la descomposición térmica por tostado. A este respecto, se pueden degradar preferentemente porciones de hemicelulosa amorfa.
De la Figura 5, se infiere que la gran diferencia en la composición del azúcar de 180 °C a 240 °C se debe a las diferentes formas en que ocurre la pirólisis de los polisacáridos en la madera en cada temperatura de tostado. Por otro lado, las cantidades de azúcares extraídos se redujeron significativamente a las temperaturas de tostado de 260 °C y 280 °C.
Estos resultados fueron consistentes con los azúcares neutros cuantificados por el método de fenol-ácido sulfúrico. Además, Glc representó la mayoría de los azúcares totales detectados a 260 °C y 280 °C (13,36 mg/L y 15,09 mg/L, respectivamente), mientras que la cantidad de Xyl, que era abundante a 240 °C, fue considerablemente mayor. reducido a estas temperaturas. Brito et al. afirmaron que la degradación completa de la hemicelulosa en la madera ocurre a una temperatura de tratamiento térmico de 250 °C o superior.
De la disminución observada en las cantidades de azúcares extraídos y la composición de los azúcares, se considera que los azúcares derivados de la hemicelulosa se desnaturalizan en otros componentes para las astillas de roble tostadas a 260 °C y 280 °C. Además, existen precursores glicosídicos en las astillas de roble que participan en los aromas derivados del roble. La cantidad de estos puede variar según las condiciones de tostado, lo que podría afectar la calidad del vino. En este experimento, no se sabe cómo se forman e hidrolizan los precursores glicosídicos en astillas de roble. Sin embargo, la cantidad y composición de los azúcares extraídos varían según las condiciones de tostado; esto podría afectar indirectamente a los componentes volátiles derivados del roble.
Una comparación de la composición del azúcar extraída de las astillas de roble tostadas a 260 °C y 280 °C reveló que la cantidad de Glc era significativamente mayor a 280 °C que a 260 °C (Figuras 4 y 5). La celulosa tiene una estructura cristalina en la madera y no se descompone fácilmente al calentarla. Por lo tanto, se considera que la hemicelulosa amorfa y la celulosa cristalina se descompusieron simultáneamente a 260 °C y 280 °C. Se extrajeron monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos de las astillas de roble tostadas a 280 °C (Figuras 4 y 5). Los resultados de este estudio infirieron que estos azúcares se extrajeron de las virutas de roble en el vino modelo.
Análisis GPC: Además de la cantidad y composición de los azúcares determinada en este estudio, nos interesó el tamaño molecular de estos azúcares. Por lo tanto, se realizaron mediciones de GPC para estimar los pesos moleculares de los azúcares extraídos de las astillas de roble (Figura 6).
Los pesos moleculares estimados de los picos de GPC se muestran en la Tabla 1. Se identificaron seis picos. Se identificaron los picos 1 y 2 para la muestra UT, y el pico 2 se identificó para la muestra de astillas de roble tostadas a 180 °C. Los picos 3 y 4 probablemente indican los pesos moleculares de los azúcares hexámero y trímero, respectivamente. El pico 3 se identificó para las muestras de astillas de roble tostadas entre 180 °C y 240 °C, pero no para las muestras tostadas a 260 °C o temperaturas más altas. El pico 5 indica el peso molecular del dímero y el pico 6 es el peso molecular del monómero.
Como los monosacáridos se identificaron mediante análisis de azúcar mediante HPLC (Figura 4), y debido a que el peso molecular estimado coincidía estrechamente con el de los monosacáridos (180), el pico 6 se consideró como monosacáridos. Es importante resaltar que también se observaron manchas correspondientes para monosacáridos en el análisis de TLC; sin embargo, estos resultados fueron excluidos de este estudio debido a la baja resolución del análisis (datos no mostrados). Por otro lado, los componentes extraídos de las astillas de roble incluyen compuestos fenólicos y polisacáridos, así como sus productos de descomposición térmica, que probablemente se detecten como picos. Por lo tanto, no se pudieron estimar los pesos moleculares de los azúcares extraídos como oligo o polisacáridos.
Conclusiones
Los experimentos de extracción de este estudio utilizando vinos modelo revelaron que los azúcares se extrajeron como monosacáridos y oligo o polisacáridos de astillas de roble francés. El análisis de la composición del azúcar reveló que Xyl y Glc se extrajeron en grandes cantidades, lo que sugiere que estos azúcares se produjeron por la descomposición térmica de la celulosa y la hemicelulosa en las astillas de roble.
Además, se aclaró que la temperatura de tostado afecta significativamente la cantidad, composición y tamaño de los azúcares extraídos.
La extracción de azúcares de las virutas de roble se debe presumiblemente a la descomposición térmica de los polímeros naturales de la madera, pero es necesario seguir experimentando con barricas, ya que es muy posible que suceda lo mismo en barricas de roble reales. El proceso también puede afectar significativamente las concentraciones de azúcares en los vinos.
GPC reveló la extracción de azúcares cuyos pesos moleculares corresponden a los monómeros. No se espera que los azúcares extraídos de las astillas de roble afecten el sabor del vino porque sus cantidades son bajas. Se deberían realizar más experimentos para determinar el efecto del azúcar extraído de las astillas de roble en el vino.
Fuente: Revista científica OENO One de IVES. Autores: Genki Kainuma, Ayano Mochizuki, Fumie Watanabe-Saito, Masashi Hisamoto, Gilles de Revel, Tohru Okuda. Vol. 58 No. 1 (2024). Publicado originalmente el 2 de abril de 2024.
